血细胞形态学检验的探讨
摘要：目的：通过对血细胞形态学检验的方法的探讨和总结，获得正确的检查结果。方法：对血细胞形态学检查的步骤和过程进行分析，改进方法并总结经验。结果：通过改进方法取得了满意的骨髓取材和标本制备，提高了染片质量，加强与临床联系从而保证正确报告。结论：通过对血细胞形态学检验过程中的细节的管理和方法的微调对取得正确的结果有较好的保证和帮助。
关键词：骨髓取材；涂片镜检
血细胞形态学检验是指应用光学显微镜辨认经瑞氏染色后的外周血和骨髓涂片的细胞形态，可以了解骨髓中血细胞的生成、成熟、释放的程度及病理细胞形态或异常细胞出现的意义，是血液病基础诊断与常规血液学检验的重要项目，是最基本的简便实用的检查方法。此方法虽然较为传统，但血细胞形态学检验的质量高低是许多疾病尤其是血液病的诊断、鉴别诊断及预后判断的关键。而血细胞形态学检验的主观性较强，检验人员需要积累丰富的工作经验才能胜任。笔者将工作中积累的一些经验和体会报告如下。
1 临床资料
满意的骨髓取材和良好的标本制备是血液形态学检查重要的前提，如果骨髓取材不佳，不但无参考价值，而且有时还会造成假象从而误导临床诊断，所以必须重视。
1.1正确的取材部位：骨髓穿刺理想部位是髂后上棘和髂前上棘处进行，因为其髓腔比较大髓液较丰富，比较容易获得符合要求的骨髓标本，且此处易定位和操作。骨髓造血呈所谓向心学说分布，造血组织往往分布不均，且某些病变只局限于局部，所以对一些疑难病例最好是多部位穿刺或取骨髓活检。
1.2合适的取材量及满意的涂片制作：骨髓取材严格来讲是难以有满意的结果，因为灶性造血影响骨髓稀释。根据报导记载，抽0.1～0.2 ml的骨髓，仍有可能混入50%的外周血。根据笔者的经验抽取0.5 ml左右是最为理想的，抽取骨髓后，将髓液置于玻片一端，然后在其下垫两张玻片，使髓液自然流下，再用推片取黏稠部分，体积大、密度大的有核细胞及带骨髓小粒的部分涂片，涂片要求厚薄均匀，头体尾明显，手持玻片迅速摇动使其风干。这就要求操作者动作熟练，经验丰富。传统的方法对操作者要求比较高，如果动作慢，易造成骨髓凝固，从而使细胞分布不均而影响到镜检结果。现在已有同行主张对骨髓标本用抗凝剂处理。用浓度为2～4 mg/ml EDTA-K2抗凝，或将0.5 ml骨髓放入血常规管内摇匀送检，可以避免临床涂片质量不佳，数量不足及细胞分布不均等影响检验结果的问题。
2 骨髓涂片由于要用油镜仔细观察细胞的细微结构，所以对染色质量要求很高。
2.1载玻片的清洁：新购置的载玻片用1%的稀盐酸浸泡24 h，除去游离碱质，再用流水冲洗干净，必要时用95%乙醇浸泡1 h，然后烘干备用。
2.2染液及染色方法的选择：笔者在工作中应用的是珠海贝索生物技术公司生产的瑞氏—姬姆萨A混合染液，经过实践应用质量可靠，染色效果较佳。在保证标本及染液质量前提下，染色技术直接影响骨髓片的质量。要根据染色时室温高低，涂片厚薄，有核细胞数量多少等不同来确定染色时间，可将带染液的玻片置于显微镜下观察，当有核细胞着色良好（核浆清晰可辨）再染上1～2 min为好，这就要求操作者具体分析，灵活掌握。
2.3骨髓涂片的观察：首先用低倍镜观察整张涂片。观察涂片染色是否合格，了解骨髓有核细胞的增生程度，计数全片巨核细胞数，尤其是注意观察片尾及周边部位有无异常细胞。用油镜观察细胞形态、比例、分类计数等。选择涂片上有核细胞分布均匀、形态舒展、清晰可辨的部位进行观察和分类。至少分类计数200个有核细胞，必要时分类500个（根据有核细胞增生程度，增生低下的少计，增生明显的多计）。当辩认某一类不典型细胞时，单纯靠形态学是有一定欠缺的，应配合相应的组织化学染色来确定，特别是在区分一些急性白血病时，组织化学染色起了重要的鉴别作用。
在做骨髓涂片同时，应作血涂片检查，二者可相互补充，相互映证。结合外周血涂片中细胞数量、形态等可对急慢性白血病，各型贫血等作出确定或支持性诊断，同时对疾病分期、疗效判断等提供有效依据，必须给予重视。
2.4重视与临床医学的联系：血细胞形态学检验与临床医学密不可分，有些血液病诊断依赖形态学结果，但都必须与患者的临床表现、阳性体征等相结合，掌握血液病的相关临床知识，对正确报告有很大的帮助。如外周血三系减少且无幼稚细胞患者伴有脾大时首先应考虑脾功能亢进，并可排除再障；而当无脾肿大时才考虑再障等。在贫血中，缺铁性贫血也鲜有脾大的，巨幼细胞性贫血脾大则多见。以单纯性血小板显著减少伴有肢体瘀点为主要体征几乎都是ITP特点。许多多发性骨髓瘤的患者都是因骨痛、腰痛或骨折等症状而就诊的。因此要深入了解患者病史，准确全面掌握患者的体格检查结果，并从中发现诊断的线索，在此基础上进行有目的有计划的实验室检查。
随着科学技术的发展，血液病的诊断单凭细胞形态学检查作为诊断依据其局限性是显而易见的，现在分子生物学技术及单克隆抗体流式细胞技术的应用已越来越广泛，白血病的免疫分型已成为可能，但还是不能否定细胞形态学在鉴定白血病中的重要地位，要不断提高工作质量，学习先进的经验来巩固和发展其在临床上的重要作用。
参考文献:
[1]朱伟,许文荣.血细胞形态学质量控制.临床检验杂志,2008,26:1.
[2]郭小平.血细胞形态学检验质量控制及临床意义.现代中西医结合杂志,2004,13:92.
[3]卢兴国,徐根波,李早荣.对血细胞形态学的一些再认识.上海医学检验杂志,2003,18:706
关键词：骨髓取材；涂片镜检
血细胞形态学检验是指应用光学显微镜辨认经瑞氏染色后的外周血和骨髓涂片的细胞形态，可以了解骨髓中血细胞的生成、成熟、释放的程度及病理细胞形态或异常细胞出现的意义，是血液病基础诊断与常规血液学检验的重要项目，是最基本的简便实用的检查方法。此方法虽然较为传统，但血细胞形态学检验的质量高低是许多疾病尤其是血液病的诊断、鉴别诊断及预后判断的关键。而血细胞形态学检验的主观性较强，检验人员需要积累丰富的工作经验才能胜任。笔者将工作中积累的一些经验和体会报告如下。
1 临床资料
满意的骨髓取材和良好的标本制备是血液形态学检查重要的前提，如果骨髓取材不佳，不但无参考价值，而且有时还会造成假象从而误导临床诊断，所以必须重视。
1.1正确的取材部位：骨髓穿刺理想部位是髂后上棘和髂前上棘处进行，因为其髓腔比较大髓液较丰富，比较容易获得符合要求的骨髓标本，且此处易定位和操作。骨髓造血呈所谓向心学说分布，造血组织往往分布不均，且某些病变只局限于局部，所以对一些疑难病例最好是多部位穿刺或取骨髓活检。
1.2合适的取材量及满意的涂片制作：骨髓取材严格来讲是难以有满意的结果，因为灶性造血影响骨髓稀释。根据报导记载，抽0.1～0.2 ml的骨髓，仍有可能混入50%的外周血。根据笔者的经验抽取0.5 ml左右是最为理想的，抽取骨髓后，将髓液置于玻片一端，然后在其下垫两张玻片，使髓液自然流下，再用推片取黏稠部分，体积大、密度大的有核细胞及带骨髓小粒的部分涂片，涂片要求厚薄均匀，头体尾明显，手持玻片迅速摇动使其风干。这就要求操作者动作熟练，经验丰富。传统的方法对操作者要求比较高，如果动作慢，易造成骨髓凝固，从而使细胞分布不均而影响到镜检结果。现在已有同行主张对骨髓标本用抗凝剂处理。用浓度为2～4 mg/ml EDTA-K2抗凝，或将0.5 ml骨髓放入血常规管内摇匀送检，可以避免临床涂片质量不佳，数量不足及细胞分布不均等影响检验结果的问题。
2 骨髓涂片由于要用油镜仔细观察细胞的细微结构，所以对染色质量要求很高。
2.1载玻片的清洁：新购置的载玻片用1%的稀盐酸浸泡24 h，除去游离碱质，再用流水冲洗干净，必要时用95%乙醇浸泡1 h，然后烘干备用。
2.2染液及染色方法的选择：笔者在工作中应用的是珠海贝索生物技术公司生产的瑞氏—姬姆萨A混合染液，经过实践应用质量可靠，染色效果较佳。在保证标本及染液质量前提下，染色技术直接影响骨髓片的质量。要根据染色时室温高低，涂片厚薄，有核细胞数量多少等不同来确定染色时间，可将带染液的玻片置于显微镜下观察，当有核细胞着色良好（核浆清晰可辨）再染上1～2 min为好，这就要求操作者具体分析，灵活掌握。
2.3骨髓涂片的观察：首先用低倍镜观察整张涂片。观察涂片染色是否合格，了解骨髓有核细胞的增生程度，计数全片巨核细胞数，尤其是注意观察片尾及周边部位有无异常细胞。用油镜观察细胞形态、比例、分类计数等。选择涂片上有核细胞分布均匀、形态舒展、清晰可辨的部位进行观察和分类。至少分类计数200个有核细胞，必要时分类500个（根据有核细胞增生程度，增生低下的少计，增生明显的多计）。当辩认某一类不典型细胞时，单纯靠形态学是有一定欠缺的，应配合相应的组织化学染色来确定，特别是在区分一些急性白血病时，组织化学染色起了重要的鉴别作用。
在做骨髓涂片同时，应作血涂片检查，二者可相互补充，相互映证。结合外周血涂片中细胞数量、形态等可对急慢性白血病，各型贫血等作出确定或支持性诊断，同时对疾病分期、疗效判断等提供有效依据，必须给予重视。
2.4重视与临床医学的联系：血细胞形态学检验与临床医学密不可分，有些血液病诊断依赖形态学结果，但都必须与患者的临床表现、阳性体征等相结合，掌握血液病的相关临床知识，对正确报告有很大的帮助。如外周血三系减少且无幼稚细胞患者伴有脾大时首先应考虑脾功能亢进，并可排除再障；而当无脾肿大时才考虑再障等。在贫血中，缺铁性贫血也鲜有脾大的，巨幼细胞性贫血脾大则多见。以单纯性血小板显著减少伴有肢体瘀点为主要体征几乎都是ITP特点。许多多发性骨髓瘤的患者都是因骨痛、腰痛或骨折等症状而就诊的。因此要深入了解患者病史，准确全面掌握患者的体格检查结果，并从中发现诊断的线索，在此基础上进行有目的有计划的实验室检查。
随着科学技术的发展，血液病的诊断单凭细胞形态学检查作为诊断依据其局限性是显而易见的，现在分子生物学技术及单克隆抗体流式细胞技术的应用已越来越广泛，白血病的免疫分型已成为可能，但还是不能否定细胞形态学在鉴定白血病中的重要地位，要不断提高工作质量，学习先进的经验来巩固和发展其在临床上的重要作用。
参考文献:
[1]朱伟,许文荣.血细胞形态学质量控制.临床检验杂志,2008,26:1.
[2]郭小平.血细胞形态学检验质量控制及临床意义.现代中西医结合杂志,2004,13:92.
[3]卢兴国,徐根波,李早荣.对血细胞形态学的一些再认识.上海医学检验杂志,2003,18:706
